microRNA PCR實(shí)驗(yàn)代測(cè)

microRNA PCR簡(jiǎn)介

microRNA ( miRNA )是一種機(jī)體內(nèi)源性表達(dá)的單鏈小分子 RNA ,位于基因組非編碼區(qū),本身不具有開(kāi)放閱讀框( open reading frame , ORF ),具有高度保守性,時(shí)序性和組織特異性。miRNA廣 泛存在于各種真核細(xì)胞中,不編碼任何蛋白質(zhì),長(zhǎng)度僅為20～24nt.成熟的miRNA 5端有一個(gè)磷酸基團(tuán),3端為羥基,由具有發(fā)夾狀結(jié)構(gòu)的約70 ～ 90nt的單鏈RNA前體經(jīng)過(guò)Dicer酶加工后形成。成熟的miRNA形成RNA誘導(dǎo)的基因沉默復(fù)合體( RNA-induced silencing complex , RISC )作用于靶點(diǎn)mRNA ,通過(guò)對(duì)mRNA剪切或抑制其翻譯過(guò)程而調(diào)控基因的表達(dá)。目前人們還不明確miRNA及其靶mRNA之間的作用機(jī)制。

microRNA PC實(shí)驗(yàn)說(shuō)明：

1、大部分基因特征前綴為：MIR；

2、需要確認(rèn)基因是3p還是5p；

實(shí)驗(yàn)室操作注意事項(xiàng)：

1.實(shí)驗(yàn)時(shí)根據(jù)試驗(yàn)的情況和性質(zhì)進(jìn)行必要的防護(hù)。根據(jù)試驗(yàn)可能發(fā)生的危險(xiǎn)事故佩戴必要的防護(hù)工具，例如穿好試驗(yàn)服，戴橡膠手套，防護(hù)面具，防毒面具等。實(shí)驗(yàn)前，要注意清理試驗(yàn)場(chǎng)周?chē)陌踩[患。檢查試驗(yàn)裝置、藥品和相關(guān)物品是否有不符合要求的情況等。

2.遵循化學(xué)藥品的性質(zhì)和化學(xué)反應(yīng)的規(guī)律，不盲目蠻干和主觀臆測(cè)化學(xué)反應(yīng)的過(guò)程。應(yīng)根據(jù)化學(xué)反應(yīng)的性質(zhì)和過(guò)程選擇匹配的反應(yīng)裝置，不可圖省事省去必要的安全措施。

3.經(jīng)常估計(jì)到實(shí)驗(yàn)的危險(xiǎn)性

實(shí)驗(yàn)事故雖不可預(yù)測(cè)，但其危險(xiǎn)性的大小是可以估計(jì)到的。即使對(duì)不大了解的實(shí)驗(yàn)，也必須推測(cè)其危險(xiǎn)程度而制訂相應(yīng)的預(yù)防措施。象下面這類(lèi)實(shí)驗(yàn)，必須十分注意。

①不了解的反應(yīng)及操作;

②存在多種危險(xiǎn)性的實(shí)驗(yàn)(如發(fā)生火災(zāi)、毒氣等);

③在嚴(yán)酷的反應(yīng)條件(如高溫、高壓等)下進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)。

4.充分作好發(fā)生事故時(shí)的預(yù)防措施并加以檢查。

平時(shí)注意熟悉需要關(guān)閉的主要龍頭、電氣開(kāi)關(guān)，滅火器的位置及操作方法，避免發(fā)生事故時(shí)才四處尋找應(yīng)急的物品。

5.實(shí)驗(yàn)的后處理。實(shí)驗(yàn)的后處理工作，亦屬實(shí)驗(yàn)過(guò)程的組成部份。特別不可忽略回收溶劑和廢液、廢棄物等的處理。

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